銳賽生物集團

化學合成

Chemical translation

實驗原理

基因的化學合成即人工合成寡核甘酸片段，通過PCR拼接的方法，獲得所需要的基因表達序列或者啟動子等功能性元件片段。基因化學合成使合成任何基因序列成為可能。

技術應用

序列密碼子優化，高效表達目的基因

基因、蛋白的功能研究

實驗流程

實驗結果展示

圖1.2目的片段的酶切電泳結果（載體片段4700bp，目的片段900bp）

TROUBLESHOOTlNG

常見問題 FAQ

Q:基因化學合成相對基因調取有哪些優勢？

A ：化學合成法雖不如基因調取(ORF)價格便宜，但在以下情況下具有無法比擬的優勢：1）基因表達豐度低，難以通過ORF克隆獲得目的基因序列；2）對序列進行密碼子優化以提高表達量，如在原核表達系統中表達真核基因序列；3）化學合成序列與目標序列完全一致，不存在突變位點或SNP；4）用于微芯片的大量cDNA合成。

Q：可否將需要的酶切點位點增加至基因兩端？

A：可以根據客戶的后期實驗需求，在目的基因兩端增加合適的限制性內切酶切位點，客戶獲得基因克隆后可直接通過酶切亞克隆至所需的載體中，方便快捷，避免了長片段PCR擴增產生點突變的可能。

Q：什么是Kozak序列，為什么建議增加在基因起始密碼子前？

A：科學家Kozak通過研究起始密碼子ATG周邊堿基定點突變后對轉錄和翻譯所造成的影響，總結出在真核生物中起始密碼子兩端序列為：

G/N-C/N-C/N-ANNATGG,如GCCACCATGG、GCCATGATGG時轉錄和翻譯效率最高，特別時-3位的A對翻譯效率非常重要。因此這些序列被成為Kozak序列，常被應用于表達載體的構建中。

Q：進行蛋白表達時，可否增加蛋白分泌信號肽？

A：蛋白胞外分泌表達時，采用經優化的蛋白分泌信號肽是提高蛋白產量的重要途徑之一。注意信號肽與靶蛋白的連接，不要由于錯誤的連接導致移碼后不能夠正常表達信號肽后面的靶蛋白。

Q：我應該如何讀取測序報告？

A：測序結果中有兩種文件類型：

“.sep”是基因序列文件，可以用記事本或DNAMAN等生物學軟件打開；

“.ab1:是測序峰圖文件，可以用chromas軟件大擴，如圖1.3所示：

圖1.3測序報告截圖

參考文獻

1. J e a n  P e c c o u d. G e n e S y n t h e s i s: M e t h o d s and Protocols. Humana Press,2012.

2. Benjamin Lewin. Genes IX [M]. Pearson Education,2007.